质粒质检标准及方法
质粒是细胞转染、蛋白表达、病毒包装、动物体内实验的核心原料，不同下游实验对质粒纯度、内毒素、完整度要求差异极大。本文整理种子级、转染级、临床前级三类质粒完整质检项目、检测手段与判定标准，方便实验按需筛选合格质粒。
| 检测项目 | 检测方法 | 种子级质粒标准 | 转染级质粒标准 | 临床前级质粒标准 |
|---|---|---|---|---|
| 质粒外观 | 目视法 | 清澈透明无杂质 | 清澈透明无杂质 | 清澈透明无杂质 |
| 测序验证 | Sanger 测序 | 插入片段正确 | 插入片段和关键调控元件正确 | 全序列正确 |
| 超螺旋含量 | 凝胶电泳 | — | ≥85% | ≥90% |
| RNA检测 | 凝胶电泳 | — | 无条带 | 无条带 |
| 基因组检测 | 凝胶电泳 | — | 无条带 | 无条带 |
| 质粒浓度 | 分光光度计 | — | 高拷贝≥500 ng/μL | ≥1000 ng/μL |
| A260/A280 | 分光光度计 | — | 1.8-2.0 | 1.8-2.0 |
| A260/A230 | 分光光度计 | — | 2.0-2.5 | 2.0-2.5 |
| 内毒素检测 | 鲎试剂凝胶法 | — | ＜0.1 EU/μg | ＜0.01 EU/μg |
| 酶切验证 | 凝胶电泳 | — | — | 条带正确无杂带 |
| 生物负载 | 培养法 | — | — | 48小时无生长 |
| 支原体检测 | PCR 法 | — | — | 阴性 |
| 细胞毒性检测 | MTT法 | — | — | 存活率 ≥90% |
| 功能检测 | 对应功能检测 | — | — | 功能正常 |
以上就是三类质粒质检的标准指标，大家可根据自身实验场景对应选用。
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